大肠埃希氏菌O157 LAMP检测试剂盒

产品说明

CSPP多重PCR检测试剂盒可同时检测空肠弯曲菌(C. jejuni)，结肠弯曲菌(C. coli)，海鸥弯曲菌(C. lari)，乌普萨拉弯曲菌(C. upsaliensis)，和胎儿弯曲菌胚胎亚种(C. fetus subsp. fetus)等5种常见的弯曲菌属致病细菌。

产品组成 （50次，20 µL PCR）

* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl₂的PCR优化反应缓冲液，以及电泳时所必需的色素试剂。使用频率高时一旦融解请于4^oC保存或分装保存。

储存条件

-20^oC长期保存。多次反复冻融会降低检测效率。

使用说明

• DNA样本处理、反应体系配制、核酸扩增和结果鉴定等各步骤应分域进行，以避免交叉污染。
• 细菌基因组DNA可使用市售试剂盒提取，也可按以下方法快速制备：

• 从平板上挑取适量菌落，加入含有200 µL ddH₂O的灭菌离心管中，涡旋震荡混匀，肉眼可见菌液浑浊即可。
• 菌液煮沸10 min，冷却至室温后，13,000 rpm离心2 min。
• 将上清移至新离心管中，即得可用于本试剂盒检测的细菌DNA模板。

• PCR反应液配制：

2 X Master Mix 10 µL

Primer Mix 4 µL

阳性对照/样品DNA 2 µL

H₂O 4 µL

反应终体积 20 µL

• PCR反应条件：

95^oC 预变性 6 min

95 ^oC 变性 30 sec

30个循环 59 ^oC 复性 30 sec

72 ^oC 延伸 30 sec

72 ^oC 延伸  7 min

• 琼脂糖凝胶（2%）电泳检测15 µL PCR扩增产物 (100 V，50 min)。5种弯曲菌属细菌的检测结果如下图所示，其中23S rRNA作为扩增反应的内参照，在所检测的5种弯曲菌属细菌均应可见其大小为650 bp的扩增片段。阳性对照应可见6条大小不同的扩增片段。

• 注意事项：

试剂使用前建议短暂离心后开启。

PCR反应液请在冰中配制，以增强检测的特异性。

本试剂盒中Master Mix包含电泳所必需的试剂，PCR反应后可直接电泳。