传统的磁珠分选是基于抗原抗体特异性识别的原理,利用特定抗体偶联磁珠来捕获目的细胞。然后在高强度磁场作用下,将磁珠标记细胞和没有标记的细胞分开。根据分选过程中标记的细胞类型的不同,可将分选分为阳性分选(正选)和阴性分选(负选)。
阳性分选(正选)是指对目的细胞进行标记,直接获得目的细胞。适用于比例较小的细胞群,以及从各种样本来源中得到目的细胞,尤其是对于一些稀有样本或者疾病来源的样本。
◆ 优点:能够获得高纯度的目的细胞,操作简便。
◆ 缺点:细胞被标记了抗体和磁珠。
阴性分选(负选)是指对非目的细胞进行标记和去除,来得到目的细胞。避免直接标记目的细胞,从而来减少细胞活化可能,适用于比较常规的样本,例如人外周血、小鼠脾脏等。
◆ 优势:可以保持目的细胞未受刺激的原始状态,得到的细胞不带有任何抗体和磁珠标记。
◆ 缺点:相对阳选而言纯度较低,成本较高。
那么阴选和阳选究竟应该怎么选择呢?
今天为您介绍的这款产品让您无需迷茫,人CD8+细胞无痕分选试剂盒,兼具了阳选和阴选的优点。能够使用阳选的方式分选CD8+细胞,然后通过无痕洗脱,让您在拥有高纯度的同时,得到的细胞还不带有任何磁珠和其他标记。
1 原理
与传统的阳选使用的特异性抗体不同,人CD8+细胞无痕分选试剂盒采用的是适配体,这是一段特异性的短链核苷酸序列。由于它的三级结构,能够通过其三维构象识别靶标分子,并具有很高的结合亲和力(图1)。
图1
重要的是,这种适配体标记是可逆的,是可以去除的。利用与适配体互补的寡核苷酸将细胞洗脱下来。
实验过程包括分选和洗脱:
分选过程,带有磁珠的适配体与PBMC孵育,在磁场作用下,被标记的目的细胞和没有标记的细胞分开(图2a)。
图2a
洗脱过程,带有磁珠的细胞与适配体互补的寡核苷酸孵育,带有磁珠的适配体从细胞上脱落,在磁场作用下,磁珠以及适配体和目的细胞分开(图2b)。
图2b
可以看出,整个洗脱过程操作非常简单,除了磁极,无需任何其它工具,只需要加入互补的寡核苷酸链,室温孵育10分钟后,通过磁极分离细胞和磁珠,即可实现CD8+细胞的洗脱。洗脱下来的CD8+细胞不带有任何标记。
2 相关数据
我们一起来看看,人CD8+细胞无痕分选试剂盒的试剂应用效果怎么样?
| 高纯度
起始样本为新鲜提取的人的PBMC细胞,起始样本和分选后的CD8+细胞的纯度分别为23.0%和98.2%(图3)。
图3
| 无痕
洗脱后的细胞CD8+细胞纯度≧98%,活率≧90%。整个过程细胞得率在70~90%之间。与国外某进口品牌的阴选相比,纯度更高(图4)。
图4
3 相关产品
产品信息 种属 分选方法
CD3+ T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
CD4+ T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
CD8+ T细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
单核细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
B细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
NK细胞分选试剂盒 人/小鼠 阴选/阳选
CD8+细胞无痕分选试剂盒 人 无痕分选
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